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兽药项目
药敏试验操作方法

药敏试验根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B琼脂法进行,药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片,试验所选择药物必须包括下列抗生素:氨苄西林(AMP),阿莫西林/克拉维酸(AMC),头孢噻吩(CFT),头孢噻肟(CTX),庆大霉素(GEN),萘啶酸(NAL),诺氟沙星(NOR),四环素(TBT),利福平(RFA),复方新喏明(SMZ)。
1 操作方法:
(1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板,37℃培养16~18小时,然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落,悬于3ml生理盐水中,混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景,调整浊度与比浊管(0.5麦氏单位)相同。
(2)用无菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个M-H培养基表面,反复几次,每次将平板旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀。
(3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面,纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片,每张纸片间距不少于24mm,纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在菌接种后15分钟内贴完纸片。
(4)将平板反转,孵育18~24小时后取出,用游标卡尺测量抑菌圈直径,从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录(附表5)。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长,进入抑菌环,磺胺药在抑菌环内出现轻微生长,这些都不作为抑菌环的边缘。结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
2 注意事项:
(1)制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿,在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm(约25-30ml培养基),琼脂凝固后塑料包装放4℃保存,在5日内用完,使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。pH过低会导致氨基糖苷类,大环内酯类失效,而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于-20℃,日常使用的小量纸片可放在4℃,但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开,用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。
(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法,将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管,放置冰箱保存。每月取出一支,传出细菌供常规用。待用剩至最后一支,可传种在M-H平板上,再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
3质量控制:
(1)质量控制方法 

是用与常规实验相同的操作方法,测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作,测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。按表2所列的数据测定相应菌株的抑菌环,并记录结果。
(2)质控试验频率

用新一批MH琼脂或新抗生素纸片时做质控。每日试验时, 同时做质控—监测系统整体质量。在每日合格的基础上,可改为每周做。一个药物/细菌组合连续30天的抑菌圈直径结果中, 超出准确质控范围的不多于3个,如符合要求, 每一质控菌株可以每周进行质控而不必每日进行。
(3)失控

一旦发现失控,应从培养基、纸片、接种菌液等方面去查找原因,并及时纠正。无明显错误而出现失控结果时要恢复每天质控, 直至找到错误原因并提出解决办法为止;用合适质控菌株连续测试5天, 所有5个抑菌圈直径都在允许范围内;恢复每周作之前,应有30个试验日有满意结果。